Grundlæggende betingelser for cellekultur
1. Passende cellekulturmedium
Et egnet cellekulturmedium er en af de vigtigste betingelser for cellevækst og -proliferation in vitro. Dyrkningsmediet giver ikke kun cellenæring og basisstoffer til fremme af cellevækst og -proliferation, men giver også et levende miljø for vækst og reproduktion af dyrkede celler.
2. Serum af høj kvalitet
I øjeblikket kræver de fleste syntetiske medier tilsætning af serum. Serum er en af de vigtigste komponenter i cellekulturmediet, der indeholder en række forskellige vækstfaktorer og andre næringsstoffer, der er nødvendige for cellevækst.
3. Konstant cellevæksttemperatur
For at opretholde den kraftige vækst af dyrkede celler skal der være en konstant og passende temperatur.
4. Egnet gasmiljø
Gas er en af de nødvendige betingelser for pattedyrscellers overlevelse, og de nødvendige gasser er hovedsageligt ilt og kuldioxid.
5. Cellekulturtemperatur
For at opretholde den kraftige vækst af dyrkede celler skal der være en konstant og passende temperatur. Forskellige typer celler har forskellige krav til dyrkningstemperatur. Standardtemperaturen for human cellekultur er 36,5 grader ± 0,5 grader. Afvigelse fra dette temperaturområde vil påvirke cellernes normale metabolisme og endda dø.
6. Egnet gasmiljø
Gas er en af de nødvendige betingelser for overlevelse af pattedyrcellekultur, og de nødvendige gasser er hovedsageligt oxygen og kuldioxid. Oxygen deltager i tricarboxylsyrecyklussen, producerer energi til cellevækst og -proliferation og syntetiserer forskellige komponenter, der er nødvendige for cellevækst.
Almindelig forurening af cellekultur
1. Bakteriel forurening
Bakteriel forurening er den mest almindelige. Når operationen er lidt forkert, vil den forårsage celleforurening. Efter bakteriel kontaminering vil det fremstå som sorte tynde strimler af sand, når det observeres under mikroskop. Stangformet osv. For det andet bliver kulturmediet gult og grumset, og fine sandformede sedimenter kan tydeligt ses i petriskålen, og der lugter fra tid til anden.
2. Svampekontaminering
Den svampekontaminerede kulturopløsning er klar og gennemsigtig, ikke som et stort udbrud af bakteriel infektion, så det er svært at opdage det tidligt. Nogle gange ligner det en filament under mikroskopet, nogle gange ligner det en koral, og langsomt vil en meget tynd sort filament vokse. Dette Når det er for sent, er det svært for cellerne at blive reddet.
3. Skimmelsvamp forurening
I overensstemmelse med svampeinfektioner, fordi dyrkningsmediet er klart, er svampeforurening svær at opdage tidligt, når det ofte er for sent. Flokformede urenheder dukkede langsomt op i dyrkningsmediet, og filamentøse masseflydende genstande kunne ses under mikroskopet, som rakler i vinden. Celler kan stadig vokse, men over tid forringes cellerne og holder op med at vokse.
4. Mycoplasma infektion
Dyrkningsmediet bliver grumset. Efter at mycoplasma inficerer cellerne, er de cytopatiske ændringer ikke tydelige, men celletilstanden bliver værre, og væksten bremses. Der kan være små sorte pletter under mikroskopet, men dyrkningsmediet er generelt ikke uklart. Efter at cellerne var blevet passeret, dukkede intercellulære sorte pletter op, cellerne blev vakuumeret, og mange celler lignede apoptose og nekrose. Til sidst flød cellerne og døde fuldstændigt.
Forebyggelse af cellekontaminering
Etablering af gode regler og forskrifter kan gå langt i at reducere celleforurening. Herunder adgangssystem, driftsnormer og dagligt ledelsessystem.
Adgangssystem: inklusive personale og materialer. Personale skal trænes, før de kan betjene sig selv, og de skal opfylde bærekravene, før de går ind i laboratoriet, såsom hvide kitler, isolationskitler, masker, handsker osv. Til de nødvendige genstande bør engangsartikler strengt taget være steriliseres og steriliseres, og købte varer skal købes fra almindelige og pålidelige kanaler. Nyindkøbte celler skal testes og verificeres før brug.
Driftsspecifikationer: Det er bedst at formulere specifikationer for rutineoperationer, og laboratoriepersonale skal følge driftsspecifikationerne, som ikke kan ændres efter behag, og desuden opdyrke gode driftsvaner for laboratoriepersonalet. For eksempel, efter at pipettespidsen er suget, vil den ikke blive forlænget ind i mediet for anden gang, og en tilstrækkelig mængde medium vil blive suget én gang. Ved tilsætning af væske bør væsken tilsættes i suspension så meget som muligt, hvilket effektivt kan forhindre mycoplasma-kontamination og cellekrydskontaminering. Derudover skal du, hvis det er muligt, kun betjene én cellelinje ad gangen, og det er bedre at have et lille tidsinterval mellem cellerne for at undgå krydskontaminering.
Dagligt ledelsessystem: Det omfatter regler og metoder for brug, rengøring og vedligeholdelse af miljø og forbrugsmaterialer, reagenser osv. Der er også styring af forbrug, lager og indkøb af reagenser og forbrugsvarer, herunder to-niveau lagerstyring af celleprøver. For de kontamineringskilder, der ikke er lette at finde, er det bedst at udføre regelmæssige tests, primært mycoplasma-kontamination og cellekrydskontaminering.
BKMAM Bio leverer tilsvarende forbrugsstoffer til cellekultur:
Engangs plast runde/firkantede petriskåle:
Højgennemsigtigt polystyrenmateriale (PS);
Overfladen er glat og flad, og der er ingen optisk forvrængning af celler under mikroskopobservation;
Stabledesign gør stabling og opbevaring lettere;
Ethylenoxidsterilisering (EO);
Slid- og korrosionsbestandighed.
Vedhæftende behandling af cellekulturskåle:
Polystyrenmateriale (PS);
Elektronstrålesterilisering, ingen pyrogen, ingen toksin;
Vakuum plasma overfladebehandling, fremragende celleadhæsion;
Overfladen er glat og flad, og der er ingen optisk forvrængning af celler under mikroskopobservation;
Stabelbart design gør stabling og opbevaring lettere.
Plastcellekulturplader:
Polystyrenmateriale (PS);
Velegnet til normal cellekultur, ikke-vedhæftende behandlingspladetype;
Ingen pyrogen, ingen toksin, steriliseret;
Let afrivningstype uafhængig emballage, nem at betjene;
Vedhæftende behandling af cellekulturplader:
Polystyrenmateriale (PS);
Adhærent behandling (TC-behandling) pladetype, egnet til dyrkning af adhærente celler;
Ingen pyrogen, ingen toksin, steriliseret;
Let afrivningstype uafhængig emballage, nem at betjene;
Alle er flad bund.
Vedhæftende behandling af cellekulturkolber:
Polystyrenmateriale (PS);
Elektronstrålesterilisering, ingen pyrogen, ingen toksin;
Vakuum plasma overfladebehandling, fremragende celleadhæsion;
Åndbart dæksel, som er befordrende for gasudveksling og forhindrer mikroorganismer i at passere igennem.
Interne/eksterne spin kryovialer:
100 procent rent polypropylenmateriale (PP);
Kan modstå 15psi, 121 graders sterilisering;
Rørvæggen er fortykket, og rørlegemet har skala og skriveområde;
Der er en silikoneringetætning mellem rørdækslets gevind og rørlegemet for at sikre tæthed;
Ingen DNase, ingen RNase, ingen pyrogen, ingen endotoksin.
